زراعة البكتيريا وطرقها الشائعة
زراعة البكتيريا وطرقها الشائعة
تعريف زراعة البكتيريا :
عندما تكون البكتيريا في حالة مناسبة لتكون قادرة على التكاثر والنمو ، يقال أنها قد تم استزراعها.
تعريف وسط الاستزراع:
لأن الميكروب هو كائن أحادي الخلية وقادر على أداء جميع وظائفه الحيوية بشكل مستقل دون الحاجة إلى خلية أخرى. يشير هذا المبدأ إلى أن الميكروبات تحتاج أيضًا إلى الطعام والماء والمواد العضوية والمعادن. الوسط المغذي الذي يحتوي على جميع احتياجات الميكروب ، بما في ذلك العناصر الغذائية والعناصر ، وما إلى ذلك ، التي تسبب نمو هذا الميكروب يسمى وسط الثقافة.
يمكن أن تكون هذه الوسيلة اليدوية مصنوعة يدويًا أو بشكل طبيعي ، أي داخل خلايا جسم الحيوان.
الدم هو أفضل بيئة لنمو البكتيريا ، فهو يلبي جميع احتياجات البكتيريا ، بما في ذلك الأكسجين ، والمغذيات ، ودرجة الحموضة المناسبة ، ودرجة الحرارة ، وما إلى ذلك.
يمكن زراعة الجراثيم في بيئات مختلفة وفي حاويات مختلفة ، ويعتمد اختيار الشكل على نوع الزراعة. على سبيل المثال ، في المزارع التي تكون فيها البيئة سائلة ، توجد أوعية استنبات أنبوبي ، وتزرع البيئات الصلبة (الأجار) في الصفيحة وفي الأنبوب.
معظم البيئات المزروعة المستخدمة في الخشب الرقائقي هي بيئات زراعة عامة ، والتي تم تصميمها بشكل أساسي لتوفير العناصر الغذائية اللازمة لنمو البكتيريا. أحيانًا يتم إثراء بيئات التخصيب هذه عن طريق إضافة العناصر الغذائية التي تسرع نمو الكائنات التي يصعب نموها. طبيعة هذه العناصر الغذائية بحيث لا يمكن تعقيمها بالوسيط الأصلي ، ولكن يجب إضافتها بشكل معقم بعد تعقيم البيئة. ومن أمثلة هذه المواد الغذائية الحليب والدهون والدم الأغنام وصفار البيض
مجموعة متنوعة من المتوسط
متوسطة انتقائية:
بعض العناصر الغذائية لها عامل انتقائي خاص بعزل أو زراعة مجموعة محددة من الميكروبات. يعمل العامل الانتقائي عادة على منع نمو الكائنات غير المرغوب فيها ، وبالتالي جعل الكائنات المرغوبة تنمو بقوة أكبر. عند إضافة عامل انتقائي إلى وسط المزرعة ، يطلق على وسط المزرعة انتقائية ، على سبيل المثال ، أجار كلوريد الصوديوم انتقائي للمكورات العنقودية.
البيئات التفاضلية:
تحتوي وسائط الثقافة التفاضلية على مكونات تسبب ظهور بعض الكائنات الحية بشكل مختلف عن البكتيريا الأخرى التي تنمو في وسط الثقافة نفسه. على سبيل المثال ، تحتوي بعض البكتيريا على انحلال الدم ، مما يعني أنها تنتج إنزيم hemolysin ، الذي يكسر خلايا الدم الحمراء في بيئة أجار دموية ، ويتم النظر إلى مستعمرتها في وسط ثقافة ذات ألوان زاهية. قد يكون هذا التقارب غير كامل أو غير كامل.
مجموعة من البكتيريا التي تنمو معًا في وسط الاستزراع بسبب النمو والتكاثر ، تشكل نقاطًا بارزة على وسط الاستزراع تختلف في الحجم وتعتمد على وسط الاستزراع ومعدل نمو وتكاثر البكتيريا ، إلخ. . هذه المجموعة من النقاط تسمى مستعمرة.
غالبًا ما تحتوي البيئات التفاضلية الأخرى على مؤشر PH. على سبيل المثال ، يعتبر وسط آجار الحديد 3 السكر (TSI) من هذا النوع. تعتبر وسائط الثقافة التفاضلية للرائحة مفيدة عندما نتعامل مع الميكروبات بنفس الشكل والخصائص.
تتميز معظم بيئات الزراعة بخصائصها ، مثل الأجار (MC) ، حيث يحتوي هذا الوسط على أملاح صفراء وكمية صغيرة جدًا من بلورات البنفسج ، وكلاهما يمنع نمو البكتيريا إيجابية الجرام. تتحول أصباغ تخمير اللاكتوز إلى اللون الأحمر وقد تشكل حلقة حمراء حول المستعمرات. مستعمرات البكتيريا غير القادرة على تخمر اللاكتوز عديمة اللون.
البيئات المثرية:
usually تستخدم هذه البيئات عادة في الحالات التي يكون فيها عدد الميكروبات التي يتم البحث عنها في عينة الطعام منخفضًا أو بسبب العدد الكبير من الميكروبات الأخرى ، يصعب فصلها. تسمح هذه البيئات للميكروبات بالنمو من حيث درجة الحموضة والمغذيات.
بيئة زراعة كاملة:
تحتوي هذه البيئة على جميع المكونات اللازمة لنمو البكتيريا وتفتقر إلى مضادات الميكروبات ، ويمكن أن تنمو فيها حوالي 80 ٪ من البكتيريا. لا تحتوي هذه البيئات على أي مثبطات أو مؤشرات ، لذلك مع نمو الميكروبات المختلفة عليها ، لا يلاحظ أي تغير في اللون. وفي الوقت نفسه ، تتمتع بيئة PCA (لوحة Kant Agar) بجودة غذائية أعلى مقارنة بـ NA (Neutrin Agar) وهي أكثر ملاءمة لنمو الميكروبات.
وسائط الثقافة الصلبة متينة في تكوينها بسبب وجود أجار في تكوينها.
ما هو أجار Agar ؟
إنه نوع من الأعشاب البحرية ، على عكس الزلاتين ، يمكن أن تتحمل درجات حرارة 37 درجة ، وهو أمر جيد لنمو جميع البكتيريا المسببة للأمراض البشرية ، ولا يمكن لأي ميكروب أن يذيبها ويهضمها. يحتوي Agar على بنية عديد السكاريد مصنوعة من سلسلة من الأعشاب البحرية. تبلغ درجة انصهاره 95 درجة ونقطة تجمده حوالي 43 درجة مئوية.
أنواع الثقافة البكتيرية:
1- الثقافة البكتيرية في وسط الثقافة السائلة (Brats)
2- الثقافة البكتيرية في وسط الثقافة الصلبة (Agar)
طريقة الثقافة البكتيرية في وسط الثقافة السائلة:
1- أولاً ، خذ يانسون وأمسكه في يدك اليمنى. ثم تبريده بالكامل على اللهب واتركه يبرد.
2- خذ الوسيط الذي يحتوي على البكتيريا (الأنبوب أو الصفيحة) في الحاجز الأيسر وافتح الباب بيدك اليمنى بجوار الشعلة. احذر من ترك باب الزراعة على مكتبك.
3- إذا كان الوسط المستزرع في الأنبوب ، مرر الفتحة خلال اللهب عدة مرات لتعقيمه ، ولا تبقي غطاء الأنبوب مفتوحًا أيضًا.
4- أدخل طرف فتحة الشرج في البيئة وقم بإزالة حلقة منه. يزرع معنى حلقة الإبرة بطرف حلقة.
5- أعد تعقيم فم الأنبوب بلهب ووضع الغطاء عليه ووضع الوسط الزراعى فى مكانه.
6- أمسك الأنبوب الذي يحتوي على وسط الاستزراع في يدك اليسرى وأدخل طرف اليانسون المصاب بالبكتيريا المطلوبة في الوسط ورجه برفق حتى تنتشر الميكروبات في البيئة.
7- في الحالات التي تقوم فيها بإزالة الجراثيم من الطبق (وسط مستنبت صلب) ، قم بإزالة القليل من الجثم بطرف اليانسون ولاحظ أنه يقال أنه يغمره في الوسط السائل ويقلب بلطف حتى يصبح متجانسًا.
8- املأ فتحة الأنبوب المحتوي على وسط الاستزراع الجديد بلهب وضع الغطاء عليه ووضعه داخل الحاضنة.
9- أعد تعقيم طرف الشرج بلهب وضعه في مكانه.
وسط الثقافة البكتيرية في الوسط الصلب:
يوجد وسط الثقافة الصلبة في شكلين:
1 - وسط الثقافة الصلبة في الأنبوب 2 - وسط الثقافة الصلبة في لوحة
في أنبوب في شكلين: عمودي (ثقافة طعنة) والمنحدرة (ثقافة مائلة). أي منهم لديه طريقة الزراعة الخاصة به؟
طريقة الزراعة العميقة في الأنابيب:
في هذه الحالة ، صب وسط زراعة الأجار (الصلب) في أنابيب اختبار معقمة مع الحفاظ على ظروف معقمة في الحالة المنصهرة ووضعها في وضع رأسي في وضع رأسي لتبريد الربح في هذه الحالة مع اليانسون المعقم الحاد في قم بإزالة بعض اللهب البكتيري من اللهب واغمره عموديًا في وسط البيئة حتى النهاية وإزالته من نفس المسار دون أي تغيير في الحالة. ثم ضع الأنبوب في الحاضنة.
تتميز طريقة الزراعة هذه بخصائص ، وهي أنه عند غمر طرف الشرج في البيئة ، في بداية دخول فتحة الشرج إلى البيئة ، تكون كثافة البكتيريا عالية ، ومع انخفاض عمق البيئة ، ينخفض عدد البكتيريا حتى النهاية. عندما يصل الأنبوب ، يتم تقليل كثافة البكتيريا ، وفي نهاية الأنبوب ، يكون وسط زراعة أنبوبة الأكسجين أقل من مساحة سطحه ، وتنمو البكتيريا بطريقة منظمة بناءً على الحاجة إلى الأكسجين (هوائي أو لا هوائي) في وسط النمو. وهي مختلفة ، مما يعني أنه إذا كانت البكتيريا هوائية ، فإنها تنمو أكثر في الجزء السطحي ، وإذا كانت لا هوائية ، فإنها تنمو أكثر في الجزء العميق. D.
طريقة زراعة المنحدر في الأنبوب:
في هذه الحالة ، يسكب وسط زراعة الأجار المعقم في الأنابيب المعقمة ويوضع على منحدر قبل أن يبرد. في هذه الحالة ، مع فتحة الشرج الحادة ، مع الحفاظ على ظروف معقمة ، قم بإزالة البكتيريا من الحوض ، وبجانب الشعلة ، قم أولاً بإدخال رأس فتحة الشرج عموديًا في الجزء الرأسي من وسط المزرعة ، ثم قم بإزالتها بلطف من نفس المسار وإزالتها دون مغادرة طرف الشرج. اسحب وضع التعرج على سطح منحدر.
تحتوي هذه الطريقة أيضًا على الكثير من الميزات للكشف عن السلالات البكتيرية وتعطينا معلومات حول ما إذا كانت الهوائية أو اللاهوائية ، بالإضافة إلى الخصائص الفريدة للبكتيريا. على سبيل المثال ، في نوع من البكتيريا ، قد يتغير لون الجزء الرأسي من وسط المزرعة ، مما يشير إلى أن البكتيريا لا هوائية أو لا هوائية ، والتي سنقوم بها لاحقًا في اختبارات محددة أخرى. يتغير الجزء عندما تدرك أنه هوائي.
طريقة أخرى للثقافة في هذه الوسيلة هي من وسط سائل ، حيث تأخذ حلقة من ثقافة سائلة بكتيرية وتعرج وتزرعها على سطح منحدر.
كيفية إعداد بيئات الزراعة:
وفقًا لتعليمات الشركة الصانعة ووفقًا للكتيب اللاصق الموجود عليها ، يمكنك إزالة الكمية المطلوبة من وسط الاستزراع المسحوق أو الصفيحة وخلطها مع الكمية الموصى بها من الماء المقطر في قارورة Erlenmeyer ، ثم حسب طلب المصنع إذا لزم الأمر. ضعها على اللهب لتوضيحها بسبب الحرارة ، ولكن هذا ليس ضروريًا في بعض البيئات. ثم ضعه في الأوتوكلاف وضعه في 121. C لمدة 15 دقيقة للتعقيم. لا توجد بعض البيئات ذات درجة الحرارة العالية في أجهزة التعقيم ، ويجب على الشركة المصنعة أن تكون على دراية بذلك. بعد التعقيم ، تصلب وسائط استزراع الآجار في قوارير إرلنماير ويجب إعادة تسخينها للاستخدام ، لكن وسائط الاستزراع السائل تظل سائلة وجاهزة للاستخدام.
كيفية تحضير بيئة مسبقة الصب:
بعد تحضير وسط الاستزراع ، الذي تم وصفه سابقًا ، لتحضير الوسط مسبك الصب ، يجب استخدام وسائط أجار (صلبة) ، بحيث يتم أولاً وضع Erlenmeyer الذي يحتوي على مستنبت على اللهب حتى يذوب تمامًا ، ثم حتى تصل درجة الحرارة إلى حوالي 45 45 درجة مئوية. عندما تصل إلى درجة مئوية ، تنتظر ، لأنه إذا كانت درجة الحرارة أعلى ، سيتراكم الكثير من البخار على باب اللوحة. بعد الوصول إلى درجة الحرارة المرغوبة بجوار اللهب والحفاظ على المعايير المعقمة لوسط الثقافة ، اسكب 15 إلى 20 سم مكعب في الألواح المعقمة ثم ضع الغطاء عليها وضعها في مكان مأهول لتبرد. كن.
زراعة الأنسجة: يمكن القيام به بثلاث طرق.
1- الزراعة الخطية
2-الزراعة السطحية
3- الزراعة المختلطة
طريقة الزراعة الخطية purplite :
تستخدم هذه الطريقة البيئة الافتراضية. بهذه الطريقة ، أولاً ، عن طريق اليانسون المعقم ، يزيل بعض اليرقات البكتيرية ويرسمها على سطح البيئة المتقدمة في خطوط متوازية في عدة اتجاهات. في الزراعة الخطية ، للحصول على مستعمرات مفردة ، يمكنك تقسيم اللوحة إلى 4 أجزاء ، ثم في الجزء الأول ، ارسم أولاً فتحة الشرج ، التي تحتوي على الزغابات البكتيرية ، في خطوط متوازية ، ثم الخطوط في المنطقة الثانية من نهاية خط النهاية في المنطقة الأولى. أنت تواصل في الاتجاه الآخر وتفعل الشيء نفسه في المنطقتين الثالثة والرابعة.
ميزة هذه الطريقة هي أنه عندما ترسم خطوطًا متوازية على سطح البيئة ، تنخفض كثافة البكتيريا بالترتيب ، وفي نهاية الخط ، تكون كثافة البكتيريا أقل ، وفي منطقة أخرى ، عند استخدام نهاية الخط السابق ، تكون الكثافة في الواقع إنها أقل بكثير من كثافة البكتيريا في البداية ، ونتيجة لذلك ، يتم تقليل عدد البكتيريا في مناطق أخرى بالترتيب ، بحيث يمكنك في المنطقة الرابعة أن يكون لديك حبيبات مفردة ، والتي تسمى مستعمرة نقية. لذلك ، تؤدي الثقافة الخطية المناسبة إلى تكوين مستعمرة نقية ، وتتكون هذه المستعمرة فقط من بكتيريا أصلية
( تعريف مستعمرة نقية ). تسمى البكتيريا المفردة بكتيريا الأم ، والتي تتشكل بعد الثقافة الخطية وانفصال الخلايا البكتيرية. لذلك ، تؤدي الثقافة الخطية المناسبة إلى تكوين مستعمرة نقية ، وتتكون هذه المستعمرة فقط من بكتيريا أصلية
( تعريف مستعمرة نقية ). تسمى البكتيريا المفردة بكتيريا الأم ، والتي تتشكل بعد الثقافة الخطية وانفصال الخلايا البكتيرية.
لاحظ أن المستعمرة النقية هي مستعمرة ليس لها اتصال بمستعمرة أخرى.
في حالة وسائط الثقافة البكتيرية السائلة ، لأداء الثقافة الخطية على وسط الصب المسبق ، أدخل الحلقة مرة واحدة فقط في الوسط الذي يحتوي على الوسط البكتيري وقم بإزالة حلقة منه ، ثم ضعه على وسط الصب المسبق وارسمه في عدة اتجاهات في خطوط متوازية. أو قم بالخطوات أعلاه عليها.
الزراعة السطحية:
في هذا النوع من الزراعة ، يتم استخدام بيئة مسبقة الصب.
كيفية الزراعة:
تُستخدم طريقة الزراعة هذه في الغالب في البيئات الميكروبية السائلة ، أو في حالة الاشتباه في وجود بيئة سائلة مثل الحليب من التلوث الجرثومي ، يمكن إعطاؤها للزراعة الميكروبية ويمكن التعرف على الكائنات الدقيقة الموجودة فيها.
للقيام بذلك ، قم أولاً بتخفيف الوسط السائل. ثم ، باستخدام ماصة معقمة ، قم بإزالة كمية معينة من التخفيف ونشره على سطح الوسط الصلب المسبق الصب بقضيب مفرش أو فتحة الشرج. وبعد الحضانة ، يمكنك رؤية المستعمرات المزروعة على سطح وسط الاستزراع ، ولاحظ أن سطح البيئة يجب أن يكون جافًا عند إجراء الزراعة السطحية.
لأنه عند صب وسط الاستزراع مقدمًا ، قد يتراكم بخار الماء على غطاء الصفيحة وسطح البيئة. لتجفيفها ، يمكن وضع البيئات في دفيئة بدرجة حرارة 25-25 درجة وتجفيفها. قم بإزالة ووضع محتويات المستنبت رأسًا على عقب على حافة الباب لإزالة قطرات الرطوبة.
يمكنك أيضًا إزالة فقاعات الهواء بعد وضع وسط الاستزراع في اللوحة إذا تراكمت فقاعات الهواء. هذا يعقم أيضا سطح وسط الثقافة.
زراعة مختلطة أو ارجواني:
في هذه الطريقة في الثقافة ، من الضروري إعداد تعليق البكتيريا. وهذا يعني أنه يجب تحضير تخفيف معين من البكتيريا المرغوبة في الوسط السائل ، ثم صب 1 سم مكعب منها في قاع الصفيحة المعقمة ، ثم من وسط الثقافة المطلوب ، والذي تم تعقيمه سابقًا وبلغت درجة حرارته حوالي 45 درجة مئوية ، بنسبة 15-20. أضف CC إلى اللوحة. ثم اخلطه جيدًا بحركة دائرية على شكل رقم إنجليزي 8. إذا كنت بحاجة إلى إعادة تغطية سطح البيئة البكتيرية بطبقة رقيقة من وسط الثقافة نفسه ، تسمى هذه الحالة أيضًا ثقافة الطبقة المزدوجة.
تعليقات